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细胞功能检测试剂盒

Annexin V实验对照设置

2022-09-07作者:admin赞:0


Annexin V实验对照设置

Annexin V是常用的检测细胞凋亡的方法,一般通过流式细胞仪来检测。为保证实验结果的准确性,方便后续数据分析,通常需要设置不同对照实验组。

①样本不带自发荧光


组别

Annexin V

核染料

样本类型

空白对照

-

-

不做任何处理的细胞

生物学对照

+

+

不做任何处理的细胞

单阳对照1

+

-

有明显凋亡的细胞

单阳对照2

-

+

有明显凋亡的细胞

实验组

+

+

实验组细胞


②样本带自发荧光


组别

Annexin V

核染料

样本类型

空白对照

-

-

不做任何处理无自发荧光的细胞

生物学对照

+

+

不做任何处理的细胞

单阳对照1

+

-

无自发荧光有明显凋亡的细胞

单阳对照2

-

+

无自发荧光有明显凋亡的细胞

单阳对照3

-

-

带自发荧光的细胞

实验组

+

+

实验组细胞


空白对照:调节阈值和仪器电压。

生物学对照:排除实验操作对实验结果的影响,扣除荧光背景,同时还可以作为实验组划门的依据。

单阳对照:调节补偿,同时也可以辅助调节该通道的电压,防止信号超出仪器接受范围。

注意事项:

*单阳对照组细胞一定要用明显有凋亡的细胞,因为调节补偿需要有足够的阳性信号

*样本带自发荧光需要设置三管单阳对照,确保每一管都只有一种荧光

实验组:检测实验结果。

Tips

样本为贴壁细胞:

*细胞培养基中漂浮的细胞需要收集,与后续收集的贴壁细胞一起检测

*避免人为操作带来的细胞损伤,如:胰酶消化时间要适宜,消化贴壁细胞时操作要轻柔等

*尽量不使用含EDTA的胰酶,因为EDTA会影响Annexin V与PS的结合。如果一定要用含EDTA的胰酶,终止消化后要将细胞洗涤干净,尽量去除EDTA

*细胞比较难消化时可以分批次进行消化,避免先消化下来的细胞被过度消化导致假阳性结果


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