酶联免疫吸附实验（ELISA）
ELISA实验FAQs之实验结果OD值偏低
ELISA是一个非常严谨、极其考验操作者技巧和经验的实验，检测结果数值低、标准曲线梯度差、背景值高、变异系数大等诸多问题也是兵家常事。
本文将常见的ELISA实验结果OD值偏低的原因及对策进行了汇总，具体如下！
整体OD值偏低或无信号
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可能原因 |
相应对策 |
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● 试剂盒组分失活 |
使用新的试剂盒，按照说明书要求保存试剂盒 |
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● 试剂盒组分未平衡 |
试剂盒每个组分都需要平衡至室温后进行实验 |
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● 试剂混用或混合不充分 |
保证使用试剂盒内完整一套试剂进行实验，保证溶液充分混合 |
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● 洗液被污染 |
配制新的洗液 |
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● 洗涤液浸泡时间过久或洗板次数过多 |
按照说明书的要求进行操作 |
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● 孵育时间不充分 |
保证充足的孵育时间 |
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● 孵育温度不稳定 |
检查恒温箱，确保孵育温度稳定 |
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● 生物素化抗体或HRP酶结合物不足 |
保证浓缩液取量准确且稀释完全 |
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● 生物素化抗体或酶结合物稀释不正确或步骤颠倒 |
按照说明书的步骤和要求进行操作 |
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● 未加终止液 |
反应结束时，确保每孔加入终止液终止反应 |
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● 终止后未及时读板 |
终止液终止反应后需要在10min内进行读板操作 |
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● 酶标仪设置错误 |
在酶标仪上检查波长和滤光片设置 |
标曲OD偏低但样本OD值正常
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可能原因 |
相应对策 |
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● 标准品部分降解 |
按照说明书推荐方式保存标准品。开封后的标准品应以最高浓度用EP管分装冻存，保存于-20℃，半个月内使用有效 |
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● 标准品复溶不当 |
打开前将标准品短暂离心，检查复溶后是否有未溶解的物质 |
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● 标准品稀释不正确 |
按照说明书要求，保证按正确倍比梯度稀释 |
标曲线性佳但样本OD值偏低
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可能原因 |
相应对策 |
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● 基质效应 |
稀释样本可以降低基质效应 |
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● 钩状效应 |
预估样本浓度选择合适的稀释倍数，并通过预实验选择最佳稀释倍数 |
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● 靶蛋白丰度不足 |
重复实验，浓缩样本或选用灵敏度更高的试剂盒 |
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● 样本处理或保存不当 |
确保正确采集与保存样本，避免反复冻融 |
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● 样本类型不适用 |
检测的样本类型不分泌检测的因子、不是均质澄清溶液（高脂/粘稠溶剂）、重组蛋白不能匹配抗体。应选择与检测样本类型相匹配的ELISA试剂盒 |
以上，是分享给大家的常见ELISA实验结果OD值偏低的原因及对策，更多问题欢迎咨询网站右侧在线客服~
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