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缓冲液配制指南

2017-09-01作者:admin赞:1Protocol下载

Buffer配方

1.0 mol/L Tris•HClpH 6.8

Tris

30.28 g

超纯水

200 mL




溶解后,用浓盐酸调pH至6.8,最后用超纯水定容至250 mL,高温灭菌后室温下保存。

1.5mol/L Tris•HClpH 8.8

Tris

45.43 g

超纯水

200 mL

溶解后,用浓盐酸调pH至8.8,最后用超纯水定容至250mL,高温灭菌后室温下保存。

10% SDS

取SDS 10g,加蒸馏水至100 mL, 50 ℃水浴下溶解,室温保存。如在长期保存中出现沉淀,水浴溶化后,仍可使用。

10% 过硫酸胺(APS

取过硫酸胺 0.1 g ,加超纯水1.0 mL 溶解后,4 ℃保存,保存时间为1周。(-20 ℃长期保存)


30% 丙烯酰胺

丙烯酰胺

29 g

NN’-亚甲双丙烯酰胺

1g

溶于总体积为50 mL的水中,定容至100 mL。室温保存于棕色瓶。

10× PBS2L

NaCl

160 g

KCl

4 g

Na2HPO4·12H2O

22.9 g

KH2PO4

4 g

dH20

1 L

NaOH调pH值至7.4,定容至2 L。保存于室温。

还原型5×SDS上样缓冲液

0.5 mol/L Tris•HClpH6.8

2.5 mL

二硫苏糖醇(DTT

0.39 g

SDS

0.5 g

溴酚蓝

0.025 g

甘油

2.5 mL

混匀后,分装于1.5 mL离心管中,4 ℃可保存数周,-20 ℃可长期保存。

电泳液缓冲液

Tris

3.03 g

甘氨酸

18.77 g

SDS

1 g

加蒸馏水溶解定容至1000 mL室温保存,1次溶液可重复使用3~5 次。

转移缓冲液

1X电转液:

甘氨酸

11.25 g

Tris

2.375 g

SDS

0.375 g

甲醇

200 mL

加蒸馏水溶解定容至1000 mL 溶解后4 ℃保存,1次溶液可重复使用3~5次。

TBS缓冲液

NaCl

8.5 g

Tirs

1.2 g

加蒸馏水溶解,冰醋酸调pH至7.2,定容至1000 mL。室温保存。


洗脱液TBST溶液

TBS溶液1000 mL ,1 mL吐温20,混匀后即可使用,最好现用现配。


封闭液含5%脱脂奶粉的TBST缓冲液)

脱脂奶粉

5 g

TBST

100 mL

溶解后使用,一次性使用。

RIPA(中)裂解液

试剂

用量

终浓度

Tris-base

0.6055 g

50 mM

NaCl

0.8766 g

150 mM

EDTA·2Na.2H2O

0.037224 g

1 mM

SDS

0.1 g

0.1%

脱氧胆酸钠

0.5 g

0.5%

NP-40

1 mL

1%

Tris-base、NaCl、EDTA、SDS称量后用蒸馏水溶解,浓HCl调pH值至7.4,先配置10%脱氧胆酸钠,加入5 mL即为0.5%,,再加入1 mL的NP-40,混匀后定容至100 mL,分装,-20℃保存。