免疫组化(IHC)

IHC常见问题分析及处理

2017-09-01作者:admin赞:49Protocol下载

问题

原因

建议

结果中显色过深

一抗浓度过高或孵育时间过长

降低一抗浓度或减少孵育时间

孵育温度过高

室温或4 孵育

HRP标记二抗孵育时间过长

缩短时间

IHC结果中非特异性显色

石蜡切片脱蜡不彻底

延长脱蜡时间

操作过程中冲洗不充分

增加冲洗的次数与冲洗时间

组织富含内源性的生物素与过氧化物酶

使用相关试剂进行封闭

发生抗原异位

 

蛋白封闭不充分

增加蛋白封闭时间

IHC结果中显色强度弱

一抗浓度过低或孵育时间过短

增加一抗浓度或延长孵育时间

试剂超过保质期

实验前确认试剂的保质期

操作过程冲洗过度

适度冲洗

IHC结果中无染色

组织中无目的抗原的表达

 

一抗种属来源与二抗不匹配

实验前确认一抗的种属来源

显色物质与HRP系统不匹配

实验前确认显色体系