常见客户提问    （：问题 ：解答）

待标记物有没有什么注意事项？

待标记物需要有游离伯胺或者N末端，样本中不能含有Tris、甘油、带氨基的蛋白或试剂。

这个生物素标记试剂盒除了标记抗体，可以标记其它蛋白吗？

生物素标记试剂盒的原理是活化的生物素的酯键和被标记物上的氨基脱水缩合形成稳定的酰胺键。此外，还可以标记蛋白的N末端。如果蛋白上有伯胺，比如赖氨酸就是可以标记的。

这个生物素标记试剂盒标记蛋白的话，是跟抗体一样以20:1的比例反应吗？

需要考虑蛋白的分子量及带的赖氨酸数量。一般是建议按照2 mg/mL的浓度标记，若带的赖氨酸数量在10-15个左右，可以按照1:20的比例。如果数量较多则把比例加大。

可以小量或者微量标记吗？

目前说明书的方法是用于标记0.1-2 mg的抗体的，如果需要标记的量更小，我们有专门的微量标记方法，用于标记20-100 μg，反应的体系为100 μL。（所以当标记浓度低于2 mg/mL,需要适当增加生物素的量。）

如何检测标记效率？

目前出售的生物素标记试剂盒是有优化标记方法的，我们也做过检测，标记效率一般是在90%以上，此外，我们的ELISA试剂盒中的抗体也是使用的生物素标记试剂盒标记的。检测标记效率可以通过生物素定量试剂盒检测标记物的生物素的含量。

生物素标记试剂盒中的超滤管能反复利用吗？

生物素标记试剂盒里面的截留管可以反复利用，用完了之后要清洗：先加纯水轻轻吹打几次，然后加0.2M的氢氧化钠，泡10 min后离心，然后再用纯水洗，短期保存放在纯水里面就可以，长期的话需要保存在20%乙醇溶液中，使用后的管子不能干燥，要保持湿润(建议不超过3次)。

溶解后的活化生物素保质期多久？

未开封前的活化生物素冻干粉在4度可以稳定保存一年，但是开封后/溶解后需要密封好，避光4度可保存一周。

蛋白分子量是3.8 kD，用3 kD的截留管合适吗？

不合适，比如你的蛋白分子量是3.8，你要选择3.8/3以下的截留孔径的管子，不然有滤过或者堵塞孔径的可能。

某某物质(例如叶酸) 是否能标记FITC？

如果某某物质上有游离伯胺就是可以标记的，若是蛋白需要考虑伯胺(赖氨酸)个数，小分子一般根据氨基个数来确定。 叶酸含氮杂环上含有一个氨基，理论上是可以标记上FITC的，但是这个位点的氨基亲核性比较弱，标记效果可能会不太好，需要客户根据其实验目的来选择做与否。