2-step plus Poly-HRP Anti Rabbit/Mouse IgG Detection System（with DAB Solution）

产品简介

Elabscience 公司最新推出的二步法免疫组化试剂盒，将二抗的单价Fab片段和过氧化物酶HRP聚合在一起，替代传统方法中的二抗和三抗，直接放大抗原抗体结合的信号，既保留了抗体特异性结合抗原的能力，又可有效地避免聚合分子过大而 造成的空间位阻。与传统的SP三步法相比，此试剂盒具有简单、快速、敏感等特点，试剂盒不再使用生物素，避免了由于内源性生物素所造成的背景染色。本产品可用于检测一抗是Rabbit和Mouse来源的单克隆抗体或多克隆抗体，本品独特的聚合物辅助剂有利于大分子的检测系统更好地结合所检测的一抗分子。此检测系统是目前已知的灵敏度最高的免疫组化检测系统。

附带的DAB显色液自带稀释液，避免由于各地方水酸碱度的不同对 DAB 显色所造成的影响。

产品组成

使用说明  

1. 脱蜡、水化组织切片。

2. 根据所应用的抗原抗体要求，对组织切片进行抗原修复。

3.试剂E-IR-R213A(3% H₂O₂)，孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶。

4. PBS或TBS冲洗，3分钟×3次。

5. 用吸水纸吸干PBS，在玻片上滴加溶液3，即5%的正常山羊血清，37°C 封闭30分钟。

6. 用吸水纸擦干玻片组织周围的液体，用油性笔在组织周围画圈，滴加适当稀释的一抗，室温或 37°C 孵育 1~2小时，或 4°C 过夜（后37°C 复温30 min），PBS或TBS冲洗，3分钟×3次。

7. 滴加 E-IR-R213B(Polymer Helper)，室温或 37°C 孵育 20分钟，PBS或TBS冲洗，3分钟×3次。

8. 滴加E-IR-R213C(Polyperoxidase-anti-mouse/rabbit IgG)，室温或 37°C 孵育20-30分钟，PBS或TBS冲洗，3分钟 ×3次。

9. 每1 mL的E-IR-R213F（DAB底物液）中，加入1滴（约50 μL）的E-IR-R213E (DAB浓缩液)。混合均匀，即配成DAB工作液。此溶液必须现配现用，配好后避光保存。4小时内使用，剩余的液体舍弃。

10. 控制好DAB显色时间，阳性信号为棕黄色或褐黄色，切勿显色过深。

11. 蒸馏水冲洗切片终止显色后复染、脱水、透明、封片。

保存条件  

2~8°C 避光保存，不得冻存，有效期12个月。