产品简介

        Elabscience^®自主研发的7-AAD染色液为Annexin V鉴定凋亡和坏死细胞辅助试剂。

        7-AAD可与双链DNA特异性结合，并产生强烈的荧光，正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，7-AAD可进入细胞内对DNA进行染色，与Annexin V搭配使用，可区分处于不同凋亡时期的细胞。

试剂盒组成

       本试剂搭配Annexin V-APC检测喜树碱诱导的Jurkat细胞凋亡效果如下图所示：

Jurkat细胞用5 μM喜树碱 (Camptothecin) (右) 或未加药 (左) 处理4 h，本试剂搭配Annexin V-APC染色后，流式细胞仪荧光检测。Annexin V-APC单阳细胞为早期凋亡细胞，Annexin V-APC和7-AAD双阳细胞为坏死或晚期凋亡细胞，7-AAD单阳细胞为裸核细胞。

 实验操作指南步骤

1.  细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300 g离心5 min，弃上清，收集细胞，PBS洗涤一次后，轻轻重悬细胞并计数。

注：本品仅在悬浮培养的细胞中验证，良好的细胞状态是实验的关键。贴壁生长的细胞用于凋亡检测时，可能会因为胰酶消化、吹打等处理导致细胞的坏死或凋亡，对实验结果可能存在不可控的影响，请谨慎处理。

2.  取1~5 × 10⁵重悬的细胞，300 g离心5 min，弃上清。用PBS洗涤细胞一次，离心后弃上清，加入500 μL稀释的1 × Annexin V Binding Buffer工作液重悬细胞。

3.  细胞悬液中加入5 μL的Annexin V- 荧光染色液和5 μL的7-AAD染色液。

4.  轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育15~20 min。

5.  反应完成后立即上机检测。如不能及时检测，请于冰上避光静置并于1小时内完成检测。

保存条件

7-AAD染色液需要避光保存。建议适当分装后-20°C保存，保质期1年。

注意事项

1.  保质期1年，为获得最佳的使用效果，请在3~6个月内使用。

2.  染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。

3.  荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。

4.  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。