TUNEL Assay Kit (HRP-DAB)[331]

产品货号:E-CK-A331

规格: / 20T / 50T / 100T
价格: / ¥1650 / ¥2850 / ¥4620

货号:E-CK-A331

货期:7~10 days

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  • 产品简介

    Elabscience®自主研发的TUNEL细胞凋亡检测试剂盒是一种高灵敏度且快速简便的细胞凋亡检测方法。待测细胞或组织样本经过生物素标记和DAB显色等步骤后,即可在普通光学显微镜下检测到细胞凋亡。

    本试剂盒适用于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片、爬片)的原位凋亡检测。


    检测原理

    细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,剪断核小体间的基因组DNA,暴露的3’-OH可在末端脱氧核酸转移酶(TdT)的催化下加上生物素标记的dUTP,辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)可与之结合,在HRP的催化下通过DAB显色可观测到凋亡细胞,从而可通过普通光学显微镜检测到细胞的凋亡。由于正常的或正在增殖的细胞中几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH形成,很少能够被标记。这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。


    试剂盒组成


    产品编号

    成分

    20 T

    50 T

    100 T

    Storage

    E-CK-A331A

     平衡液

    1.0 mL

    1.25 mLx2

    5.0 mL

    -20°C

    E-CK-A331B

     TdT

    80 μL

    200 μL

      400 μL

    -20°C

    E-CK-A331C

     蛋白酶K(50 ×)

    40 μL

    100 μL

      200 μL

    -20°C

    E-CK-A331D

     Streptavidin-HRP

    10 μL

    25 μL

    50 μL

    2~8°C

    E-CK-A331E

     Biotin-dUTP

    20 μL

    50 μL

    100 μL

    -20°C

    E-CK-A331F

     DAB浓缩液(20 ×)

          200 μL

    500 μL

    1 mL

    -20°C

    E-CK-A331G

     DAB稀释液

    4 mL

    10 mL

       2× 10 mL

    -20°C

    说明书

    一份



    自备试剂

    1、 细胞样本

    固定液(4%多聚甲醛溶于PBS中,推荐使用Elabscience®E-IR-R113)。

    阻断液(3%的H2O2溶于去离子水,推荐使用Elabscience®E-IR-R115)。

    通透液(0.1%的Triton-100溶于0.1%柠檬酸钠,推荐使用Elabscience®E-IR-R122)。

    2、 石蜡切片

    二甲苯、乙醇、PBS(推荐使用Elabscience®E-BC-R187)。

    阻断液(3%的H2O2溶于去离子水,推荐使用Elabscience®E-IR-R115)。

    3、 冰冻切片

    固定液(4%多聚甲醛溶于PBS中,推荐使用Elabscience®E-IR-R113)。

    阻断液(3%的H2O2溶于去离子水,推荐使用Elabscience®E-IR-R115)。

    通透液(0.1%的Triton-100溶于0.1%柠檬酸钠,推荐使用Elabscience®E-IR-R122)。

    4、 阳性样本:DNase I。

    5、 其他试剂  

          PBS、苏木素(核染色液,推荐使用Elabscience®E-IR-R120)、中性树胶(推荐使用Elabscience®E-IR-R118)。

     

    产品使用说明

    1、蛋白酶K(50 ×)[E-CK-A331C]为浓缩液,实验前用PBS稀释成1×蛋白酶K工作液。

          例如,取10 μL蛋白酶K (50 ×) [E-CK-A331C],加入到490 μL的PBS中,混匀即为1×蛋白酶工作液。

    2、 DAB浓缩液(20 ×)[ E-CK-A331F]为浓缩液,实验前用DAB稀释液[E-CK-A331G]稀释成1×DAB工作液。

          例如,取10 μL的DAB浓缩液(20 ×) [ E-CK-A331F],加入190μL的DAB稀释液[ E-CK-A331G],混匀后即为1×DAB工作液。


    保存条件

    Streptavidin-HRP[E-CK-A331D] 保存于2~8°C ,其余试剂-20°C 保存。Streptavidin-HRP[E-CK-A331D]和DAB[E-CK-A331F]需避光保存。

     

    注意事项

    1.保质期1年。为获得最佳的使用效果,请在3~6个月内使用。

    2. TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂,但不会检测出射线等诱导的DNA断裂。一方面可以把凋亡和坏死细胞区分开,另一方面不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。极少数细胞凋亡时没有DNA断裂,此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下,最好同时检测多个凋亡指标。

    3. PBS清洗样本后,请尽量除去PBS溶液后再进行下一步操作。

    4.实验过程中请保持样本的湿润,防止干片造成的实验失败。

    5. TdT酶工作液现配现用,短暂于冰上保存,长期保存会导致酶失活影响实验结果。

    6.如果20×DAB溶液颜色变深成为紫色,则不可使用,需重新配制。

    7.本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

    8.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 H2O2H2O2H2O2

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