酶联免疫吸附实验(ELISA)

ELISA结果计算

2016-01-23作者:admin赞:4


作为ELISA的最后一步,检测结果的计算对整个实验十分重要。

以夹心法为例。

1.  ELISA的样本通常要设置1~2个复孔进行检测,分别求出标准品、实验组样本的吸光度的平均值。单个样本的检测值不应超出平均值的20%。

2.  样本的OD(吸光度)平均值要减去标准品浓度为0时的OD平均值。

3.  建立标准曲线

在对数坐标图上拟合四参数的逻辑函数曲线(X轴上为标准品浓度,Y轴为对应的OD值)。推荐使用origin软件。

详细步骤如下:

第一步: 输入OD值和标准品浓度


第二步:选择拟合曲线类型

选中输入的数值框,按如下操作依次点击选项。



第三步:勾选“find specific X/Y”

完成上述操作后,点击Fit按键,拟合曲线和相关信息将自动生成(如第四步所示)

第四步:查看标准曲线信息(如参数值,R-Square等)


第五步:设置坐标轴类型为对数。

双击第四步中的拟合曲线图,对其进行编辑。双击X轴、Y轴设置坐标类型为“Log10”。

第六步:根据标准曲线计算样本浓度

选择第四个工作表(Fit NLF Find X from Y1),在左列输入样本的OD值,对应的浓度将在右列自动生成。


如果样本的OD值超出标准曲线的上限,请在实验前适当稀释样本以获得精确结果。在分析数据时,样本实际浓度应为标准曲线上获得的浓度乘以稀释倍数。


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