分类

特征

流体样本

骨髓、外周血、体液（胸水、腹水、脑脊液）

细胞为单细胞，需要加抗凝剂和裂解红细胞

体外培养传代的细胞系细胞

包含贴壁细胞和悬浮细胞

实体样本

非免疫系统组织：肝脏、心脏、肺脏、胃肠组织、脑组织等

细胞紧密连接，需要通过酶消化或者研磨制备单细胞悬液

免疫系统：胸腺、脾脏、淋巴结等

名称

处理方法

保存方法和时长

注意事项

应用

外周血样本

采集新鲜样本与抗凝剂充分混匀，注明样本采集日期和时间

室温：乙二胺四乙酸二钾可稳定保存12~24 h；枸橼酸葡萄糖液可稳定保存72 h；肝素钠抗凝剂可稳定保存48 h

若白细胞计数、白细胞分类与流式细胞术检测共用同一管样本，应选择乙二胺四乙酸二钾作为抗凝剂

血液疾病的免疫分型检测；白细胞计数；白细胞形态学染色和分类

骨髓样本

人骨髓样本：新鲜样本采集后置于肝素钠抗凝剂中

正常样本T细胞检测，室温肝素钠抗凝保存48 h；B细胞检测4℃保存72 h；单核及髓系表型检测4℃环境下可保存48 h；高分化淋巴瘤样本检测建议采集后立即检测

不宜采用其他抗凝剂，因骨髓穿刺液样本与枸橼酸葡萄糖液的比例不是最佳时易导致PH值的改变，从而降低细胞的活性

免疫系统疾病的表型分析；形态学染色分析

小鼠骨髓样本：1~2mL注射器吹打成单细胞悬液，裂解红细胞后，重悬于无菌RPMI培养液等组织培养介质中

活细胞：单细胞悬液使用染色缓冲液4℃可保存24 h；

固定细胞：采用4%的多聚甲醛溶液室温固定30 min，离心洗涤，1%甲醛的磷酸缓冲液重悬细胞沉淀，4℃保存1周

冰上裂解红细胞，红细胞裂解时长不超过1 min；固定后的细胞使用1%甲醛或多聚甲醛缓冲液重悬时，该缓冲液应现配现用

细胞分选；体外培养和扩增；免疫学相关研究；骨髓免疫细胞表型分析

胸水、腹水、脑脊液样本

标准化操作收集样本，胸水、腹水样本可选用肝素钠、乙二胺四乙酸二钾、枸橼酸葡萄糖液作为抗凝剂；脑脊液使用Transfix等培养基或转运基质

胸/腹水样本4℃环境下可保存24 h；脑脊液4℃可保存24～48 h

选用枸橼酸葡萄糖液抗凝剂过夜保存的样本细胞较弱、活性较低，注意其和抗凝剂保持合适比例；脑脊液不适用任何抗凝剂

免疫系统疾病的表型分析；形态学染色分析

体外培养的细胞系

悬浮细胞直接收集；

贴壁细胞酶消化后收集

立即检测，室温3 h内处理

针对不同的检测方法选用合适的缓冲液，避免一些金属离子的干扰

活细胞AnnexinV凋亡检测；细胞死活分析；细胞表型分析等

固定后保存：TUNEL流式固定液室温固定60 min后，离心洗涤，再使用90%FBS+10%DMSO冻存，可稳定保存2个月

细胞固定要充分；冻存细胞注意梯度降温

TUNEL流式检测；耐固定表型抗体检测等

固定后保存：70%冰乙醇-20℃固定保存1周

细胞沉淀使用PBS重悬，加入-20℃预冷的无水乙醇至终浓度为70%，加固定液的过程注意边加边混匀，避免细胞凝集聚团

细胞周期检测；DNA探针检测等

名称

处理方法

保存方法和时长

注意事项

应用

肝脏、心脏、脾脏、肾脏、脑组织、肺脏、胃肠等硬度较小组织

筛网研磨法处理；酶消化法处理

活体组织：组织培养基浸泡，4℃可保存24～48 h；置于0.9%氯化钠溶液中，4℃环境下可保存24 h。

单细胞悬液：细胞沉淀使用HBSS缓冲液(含钙镁离子)或者全培养基重悬4℃可保存24 h；

固定细胞：制备成单细胞悬液后，采用4%的多聚甲醛溶液室温固定30 min，离心洗涤，1%甲醛的磷酸缓冲液重悬细胞沉淀，4℃保存1周

研磨组织注意筛网浸入培养基中，采用较软的乳胶棒或者注射器活塞端进行研磨，避免细胞物理损伤；酶消化法注意细胞勿消化过度；酶消化后及时加入HBSS缓冲液（含钙镁离子）进行终止消化和离心洗涤，含钙镁离子的缓冲液有助于维持细胞的活力

细胞分选；免疫细胞表性分析；免疫细胞细胞因子分泌功能检测等

淋巴结、软骨、实体肿瘤等硬度较大的组织

酶消化法

不易采用研磨法处理硬度较大的组织，会导致细胞破碎；酶消化法的注意事项同上