25-HVD3(25-Hydroxy Vitamin D3) ELISA Kit
25羟基维生素D3(25-HVD3)酶联免疫吸附测定试剂盒
| 规格： | / 96T / 48T / 96T*5 |
| 价格： | / ￥2400 / ￥1650 / ￥10200 |
货号：E-EL-0015
反应性: 通用
检测范围: 3.13~200 ng/mL
灵敏度: 1.88 ng/mL
用途
该试剂盒用于体外定量检测血清、血浆或其他相关生物液体中25-HVD3浓度。
检测原理
本试剂盒采用竞争ELISA法。用25-HVD3抗原包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的25-HVD3与包被的25-HVD3竞争生物素标记的抗25-HVD3单抗上的结合位点，游离的成分被洗去。加入辣根过氧化物酶标记的亲和素，生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，25-HVD3浓度与OD450值之间呈反比，通过绘制标准曲线计算出样品中25-HVD3的浓度。
| 反应类型 | 竞争法 |
| 规格 | 96T |
| 反应时间 | 2.0h |
| 反应性 | 通用 |
| 检测方法 | Colormetric |
| 检测范围 | 3.13-200 ng/mL |
| 灵敏度 | 1.88 ng/mL |
| 样本体积 | 50μL |
| 样本类型 | 血清、血浆或其他相关生物液体 |
特异性
可检测样本中的25-HVD3，且与其它相关蛋白无明显交叉反应。
重复性
板内，板间变异系数均<10%。
典型数据
由于实验操作条件的不同（如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等），标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
| (ng/mL) | O.D | Average |
|---|---|---|
| 200 | 0.401 0.435 |
0.418 |
| 100 | 0.54 0.546 |
0.543 |
| 50 | 0.757 0.741 |
0.749 |
| 25 | 1.037 1.043 |
1.04 |
| 12.5 | 1.385 1.371 |
1.378 |
| 6.25 | 1.698 1.676 |
1.687 |
| 3.13 | 1.914 1.916 |
1.915 |
| 0 | 2.224 2.232 |
2.228 |
精密度
板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。
板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
| Intra-assay Precision | Inter-assay Precision | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
| n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
| Mean (ng/mL) |
9.44 | 28.15 | 88.19 | 9.08 | 27.46 | 85.89 |
| Standard
deviation |
0.62 | 1.47 | 2.88 | 0.52 | 1.21 | 4.08 |
| C V (%) | 6.57 | 5.22 | 3.27 | 5.73 | 4.41 | 4.75 |
回收率
分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白，做回收实验，得出回收率范围和平均回收率。
| Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
|---|---|---|
| Serum (n=5) | 87-100 | 92 |
| EDTA plasma (n=5) | 86-99 | 92 |
| Cell culture media (n=5) | 95-112 | 102 |
线性
分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白，做回收实验，得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍，4倍，8倍，16倍做回收实验，得出回收率范围及平均回收率。
| Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) | ||
|---|---|---|---|---|
| 1:2 | Range (%) | 97-112 | 97-111 | |
| Average (%) | 98 | 102 | 103 | |
| 1:4 | Range (%) | 91-101 | 99-113 | 99-112 |
| Average (%) | 96 | 105 | 105 | |
| 1:8 | Range (%) | 90-103 | 93-110 | 97-111 |
| Average (%) | 96 | 100 | 105 | |
| 1:16 | Range (%) | 92-104 | 97-111 | 92-108 |
| Average (%) | 98 | 103 | 100 | |
试剂盒组成及保存
未拆封的试剂盒可在4℃保存一周；如果一周以后才使用试剂盒，请拆开试剂盒按照下表中的条件分别保存各组分。
| 中文名称 | 英文名称 | 规格 | 保存条件 |
|---|---|---|---|
| ELISA酶标板(可拆卸) | Micro ELISA Plate(Dismountable) | 8 孔×12 条 | -20℃，可存放6个月 |
| 冻干标准品 | Reference Standard | 2支 | |
| 浓缩生物素化抗体(100×) | Concentrated Biotinylated Detection Ab | 1支 120 μL | |
| 浓缩HRP酶结合物(100×) | Concentrated HRP Conjugate | 1支 120 μL | -20℃(避光)，可存放6个月 |
| 标准品&样品稀释液 | Reference Standard & Sample Diluent | 1瓶 20 mL | 4℃.可存放6个月 |
| 生物素化抗体稀释液 | Biotinylated Detection Ab Diluent | 1瓶 14 mL | |
| 酶结合物稀释液 | HRP Conjugate Diluent | 1瓶 14 mL | |
| 浓缩洗涤液(25×) | Concentrated Wash Buffer (25×) | 1瓶 30 mL | |
| 底物溶液(TMB) | Substrate Reagent | 1瓶 10 mL | 4℃(避光) |
| 反应终止液 | Stop Solution | 1瓶 10 mL | 4℃ |
| 封板覆膜 | Plate Sealer | 5 张 | |
| 产品说明书 | Product Description | 1 份 | |
| 质检报告 | Certificate of Analysis | 1 份 |
说明：所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染。
试剂体积以实际发货版说明书为准。相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出。
试验所需自备物品
- 1.酶标仪(450nm波长滤光片)
- 2.高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
- 3.37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
- 4.吸水纸
操作步骤
|
|
1. 对应板孔中加入50μL标准品工作液或样本后，立即每孔加入50μL生物素化抗体工作液，37℃孵育90分钟 |
| 2. 弃掉板内液体，洗板3次 | |
| 3. 每孔加入100μL HRP酶结合物工作液，37℃孵育30分钟，弃掉板内液体，洗板5次 | |
| 4. 每孔加入90μL底物溶液，37℃孵育15分钟 | |
| 5. 每孔加入50μL终止液 | |
| 6. 立即在450nm波长下读数，处理数据 |
客户发表文献
- 文献: Pterostilbene-isothiocyanate impedes RANK/TRAF6 interaction to inhibit osteoclastogenesis, promoting osteogenesis in vitro and alleviating glucocorticoid induced osteoporosis in rats
样品类型: serum - 文献: Hydrophilic and Insoluble Electrospun Cellulose Acetate Fiber-Based Biosensing Platform for 25-Hydroxy Vitamin-D3 Detection
样品类型: serum - 文献: Lactobacillus rhamnosus GG Promotes Intestinal Vitamin D Absorption by Upregulating Vitamin D Transporters in Senile Osteoporosis
样品类型: plasma - 文献: A prebiotic, short-chain fructo-oligosaccharides promotes peak bone mass and maintains bone mass in ovariectomized rats by an osteogenic mechanism
样品类型: Serum - 文献: Chronic vitamin D3 supplementation alleviates cognition impairment via inhibition of oxidative stress regulated by PI3K/AKT/Nrf2 in APP/PS1 transgenic mice
样品类型: cortex tissue - 文献: Postnatal Vitamin D Intake Modulates Hippocampal Learning and Memory in Adult Mice
样品类型: Serum - 文献: Conjugated linoleic acid prompts bone formation in ovariectomized osteoporotic rats and weakens osteoclast formation after treatment with ultraviolet B
样品类型: Serum - 文献: Brazil nut intake increases circulating miR-454-3p and miR-584-5p in obese women
样品类型: serum - 文献: Vitamin D, vitamin D binding protein, vitamin D receptor levels and cardiac dysautonomia in patients with multiple sclerosis: a cross-sectional study
样品类型: serum - 文献: Determinants for low bone mineral density in pre-school children: a matched case-control study in Wuhan, China
样品类型: serum - 文献: Bacillus Calmette-Guérin (BCG) stimulates changes in dendritic cell surface marker expression in vitamin D-deficient mice:
样品类型: Serum - 文献: The Association Between Ferritin and Vitamin D Levels in Premenopausal Fibroid Uterus Cases With Anemia
样品类型: serum - 文献: Increased vitamin D binding protein levels are associated with irritable bowel syndrome
样品类型: serum
