Cell Stimulation MIX Kit

产品简介

Elabscience^® Cell Stimulation MIX Kit是佛波酯(Phorbol 12-Myristate 13-Acetate, PMA)和离子霉素(Ionomycin)的混合物，可诱导多种细胞活化并分泌细胞因子。诱导后的细胞上清可以用免疫学的方法检测细胞因子，也可以在适当时间加入Protein Transport Inhibitor MIX [E-CK-A013]，通过流式的方法检测细胞因子。

试剂配制

500× Cell Stimulation MIX：每管Cell Stimulation MIX中加入100 μL Cell Stimulation MIX Solvent，充分吹打混匀配制成500× Cell Stimulation MIX。

注：使用前可以在2000~10000×g离心数秒后开盖使用。

操作指南

应用一：细胞因子培养上清

1.         用完全培养基（自备）将样本制备成单细胞悬液，并调整细胞密度为1~2×10⁶/mL。

注：细胞密度不可过高，最大密度不超过2×10⁶个/mL，细胞密度过高会影响细胞的激活效率；关注细胞状态，对于新鲜制备的原代细胞，先观察确认细胞状态良好后再诱导检测。

2.         每1 mL细胞悬液中，加入2 μL的500× Cell Stimulation MIX，于37°C、5% CO₂培养箱中孵育细胞4~18 h（建议根据所需检测的细胞因子设置不同的诱导时间，常见诱导时间可参考附表1）。

3.         收集细胞培养上清进行后续检测或-80°C冻存备用（上清即为含有多种细胞分泌的细胞因子上清，后续可通过ELISA或其他生化试剂检测细胞因子的含量及活性）。

应用二：胞内因子检测

1.         用完全培养基（自备）将样本制备成单细胞悬液，并调整细胞密度为1~2×10⁶/mL。

注：细胞密度不可过高，最大密度不超过2×10⁶个/mL，细胞密度过高会影响细胞的激活效率；关注细胞状态，对于新鲜制备的原代细胞，先观察确认细胞状态良好后再诱导检测。

2.         每1mL细胞悬液中，加入2 μL的500× Cell Stimulation MIX，于37°C、5% CO₂培养箱中孵育细胞0.5~1 h。

3.         每1mL细胞悬液中，加入1 μL 1000×Protein Transport Inhibitor MIX [E-CK-A013]，于37°C、5%CO₂培养箱中继续孵育5~16 h（根据所需检测的细胞因子设置不同的诱导时间，常见诱导时间可参考附表1）。

4.         收集细胞悬液，250~300×g离心5 min，弃上清，收集细胞沉淀，固定后即可用于后续的胞内因子检测。

附表1：胞内因子诱导条件参考

常见问题及解决方案

注意事项

1.         本产品仅限于专业人员的科学研究使用。

2.         由于Protein Transport Inhibitor MIX中布雷菲德菌素A对CD69的影响，建议在检测CD69时，不加Protein Transport Inhibitor MIX。但此操作可能会导致胞内因子分泌到细胞外而检测不到。

3.         请注意安全事项，遵守实验室试剂操作规范操作。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4.         请按照合适的温度保存本产品，以免失效。