Foxp3/Transcription Factor Staining Kit

产品简介

Elabscience^® Foxp3 / Transcription Factor Staining Kit 是一款经过优化的专门针对转录因子、核蛋白 （例如 Foxp3 和 STAT3）等流式抗体进行细胞核内抗原染色时所用的固定、破膜试剂。 

使用说明

本试剂盒中Fixation Concentrate (4×) [E-CK-A108A] 为4×浓缩液，实验前用Fixation Dilution Solution [E-CK-A108B] 稀释成1× Fixation Working Solution。

例如：取1 mL的Fixation Concentrate (4×) [E-CK-A108A]，加入到3 mL Fixation Dilution Solution [E-CK-A108B] 中，充分混匀后的混合物即为1× Fixation Working Solution。每一份检测样本需要1 mL 1× Fixation Working Solution。

本试剂盒中Permeabilization Buffer (10×) [E-CK-A108C] 为10×浓缩液，实验前加去离子水稀释成1× Permeabilization Working Solution。

例如：取1 mL的Permeabilization Buffer (10×) [E-CK-A108C]，加入到9 mL去离子水中，充分混匀后的混合物即为1× Permeabilization Working Solution。每一份检测样本需要6.5 mL 1×Permeabilization Working Solution。

操作指南

1.       取100 μL细胞/管（约1×10⁶个细胞）于流式管内。

2.       [可选步骤] 根据说明书进行Fixable Viability Dye（死活细胞鉴定染料）染色。

3.       [可选步骤] 根据实验需求对细胞悬液进行 Fc 受体封闭。

4.       按照抗体说明书加荧光标记抗体染细胞表面Marker。

5.       孵育完成后加入1 mL细胞染色缓冲液[E-CK-A107]，300×g离心5min，弃上清，再加入100 uL细胞染色缓冲液[E-CK-A107]重悬细胞。

6.       加入1 mL 1×Fixation Working Solution，涡旋混匀，4℃反应30min，反应完后，600×g离心5min，弃上清。

7.       加入2 mL 1×Permeabilization Working Solution，涡旋混匀，600×g离心5min，弃上清。

8.       重复步骤7。

9.       加入100 μL 1×Permeabilization Working Solution重悬细胞。

10.   按照抗体使用说明书加荧光标记的核染色抗体，混匀后室温避光孵育30 min。

11.   加入2 mL 1×Permeabilization Working Solution，600×g离心5 min，弃上清。

12.   加入适量细胞染色缓冲液[E-CK-A107]重悬细胞，即可上机检测。

注意事项

1.       Permeabilization Buffer (10×) 有沉淀属于正常现象，不影响使用效果。

2.       固定和破膜步骤可能会改变细胞的光散射特性，并可能增加非特异性背景染色。在染色过程中加入BSA或胎牛血清（FCS）等蛋白质可能有助于减少非特异性背景。此外，建议使用Fixable Viability Dye（死活细胞鉴定染料），以帮助排除数据分析过程中的死细胞。

3.       本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

4.       为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。