Intracellular Fixation/Permeabilization Buffer Kit

产品简介

    Elabscience^® Intracellular Fixation/Permeabilization Buffer Kit是一款经过优化的专门针对细胞因子和趋化因子等细胞内抗原染色时所用的固定、破膜试剂。

使用说明

    本试剂盒中Permeabilization Buffer (5×) [E-CK-A109B] 为5×浓缩液，实验前用去离子水稀释成1×Permeabilization Working Solution。

    例如：取1 mL的Permeabilization Buffer (5×) [E-CK-A109B]，加入到4 mL去离子水中，充分混匀后的混合物即为1×Permeabilization Working Solution。

操作指南

1. 取100 μL细胞/管（约1×10⁶个细胞）于流式管内。

2. [可选步骤] 根据说明书进行Fixable Viability Dye（死活细胞鉴定染料，自备）染色。

3. [可选步骤] 根据实验需求对细胞悬液进行Fc受体封闭。

4. 按照抗体说明书加荧光标记抗体染细胞表面Marker。

5. 孵育完成后加入2 mL PBS（含1% BSA）或Cell Staining Buffer [E-CK-A107]重悬细胞，300×g离心5min，弃上清。

6. 加入200 µL PBS（含1% BSA）或Cell Staining Buffer [E-CK-A107]重悬细胞，然后加入200 µL Fixation Buffer于室温避光孵育30~60 min（室温低于25°C时请适当延长孵育时间到60 min）。

7. 加入1 mL 1×Permeabilization Working Solution，600×g离心5min，弃上清。

8. 加入100 µL 1×Permeabilization Working Solution重悬细胞，按照抗体使用说明书加入相应的胞内染色抗体，混匀后室温避光孵育30 min。

9. 加入2 mL PBS（含1% BSA）或Cell Staining Buffer [E-CK-A107]，600×g离心5 min，弃上清。

10. 加入适量PBS或Cell Staining Buffer [E-CK-A107]重悬细胞，即可上机检测。

注意事项

1. 本产品仅限于专业人员的科学研究用。

2. Permeabilization Buffer (5×) 可能会出现沉淀，属于正常现象，不影响使用效果。

3. 对于有红细胞的样本，使用该产品前请先进行红细胞的裂解。

4. 固定和破膜步骤可能会改变细胞的光散射特性，并可能增加非特异性背景染色。在染色过程中加入BSA或胎牛血清（FBS）等有助于降低非特异性背景。此外，建议使用Fixable Viability Dye（死活细胞鉴定染料），以帮助排除数据分析过程中的死细胞。

5. 本产品能与大部分商用流式抗体兼容，但某些抗原决定簇对固定剂敏感，固定时间需要根据实际情况进行优化。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。