RIPA Lysis Buffer (Strong)

产品简介

RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液，作为Western Blot试验中从动物组织或细胞中提取蛋白的首选裂解液。

产品组成

产品使用说明

1.组织样本的处理

a.取待测组织样本，用预冷的PBS（0.01 M，pH=7.4）充分洗涤，洗去组织表面血液及内部杂物。

b.称重剪碎，加入适量比例的RIPA裂解液混合物（1 mL的RIPA裂解液中加入10 μL PMSF和10 μL原矾酸钠）进行匀浆裂解。建议按组织重量：RIPA体积=3:10的比例匀浆，例如0.3 g的组织样本加入1 mL的RIPA裂解液，具体体积可根据实验需要适当调整。

c.匀浆后冰上震荡裂解30 min。

d.用移液器反复吹打样本50次左右，确保DNA链被打断，降低样本粘度。

e.4°C下12,000 rpm离心10 min，取上清，待测定蛋白浓度。

2.细胞样本处理

a.收集待测细胞样本，用预冷的PBS（0.01 M，pH=7.4）充分洗涤，洗去培养基等成分（一般建议洗涤3次）。

b.加入适量比例的RIPA裂解液混合物（1 mL RIPA裂解液中加入10 μL PMSF和10 μL原矾酸钠）进行冰上裂解30 min。建议6孔板中每孔加入0.1 mL RIPA裂解液（细胞中的蛋白含量可能会不同，可适当调整加入裂解液的体积）。

c.用移液器反复吹打样本50次左右，确保DNA链被打断，降低样本粘度。

d.4°C 下12,000 rpm离心10 min，取上清，待测定蛋白浓度。

RIPA裂解液主要成分

50 mM Tris (pH=7.4)，150 mM NaCl，1% TritonX-100，1% 脱氧胆酸钠，1 mM EDTA，0.1% SDS，10 mM氟化钠，1 mM原钒酸钠，1 mM PMSF。

保存条件  

-20°C冻存，保质期12个月。

注意事项   

1.  裂解样品的所有步骤都需在冰上或4°C进行。

2.  PMSF和原矾酸钠在使用前添加,每1 mL裂解液中加入10 μL PMSF和10 μL原矾酸钠，使终浓度为1 mM。如发现RIPA有沉淀，请放置室温或温水浴进行溶解。

3.  RIPA裂解液的裂解产物中可能会出现一团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。用移液器反复吹打样本50次左右，可以有效降低样本样本粘度，离心后取上清进行后续试验。

4.  用RIPA裂解的得到的蛋白样品，因含有高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定样品的蛋白浓度，建议使用BCA法测定蛋白浓度。

5.  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。