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流式课堂

流式课堂|小鼠特有细胞Marker的选择

2023-07-19作者:admin赞:0

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查阅文献时,不少文献提到小鼠独有的F4/80NK1.1CD90.1/CD90.2CD45.1/CD45.2,您是否对这些特有的指标感到疑惑?为什么有的小鼠用这个指标,有的用那个指标?这些指标该怎么选择?另外,小鼠CD16/32表面Fc受体是怎么回事,要怎么封闭,这期流式课堂就让带大家一起解答吧。


F4/80-成熟小鼠巨噬细胞标志物


F4/80又称EMR1或Ly71,是一种广泛应用于小鼠的巨噬细胞标志物,F4/80表达于多种成熟的巨噬细胞中,如枯否细胞、朗格汉斯细胞、小神经胶质细胞以及位于腹腔、肺、肠、胸腺、脾脏红髓、骨髓基质中的巨噬细胞。


F4/80为成熟小鼠巨噬细胞标志物,流式检测时用F4/80+CD11b+可以与其它单核细胞区分,检测结果如下图所示:

小鼠腹腔巨噬细胞检测

            图1:小鼠腹腔巨噬细胞检测


CD16/32-细胞表面Fc受体


CD16是低亲和力IgG Fc受体III(FcR III),CD32是FcR II。 它们可结合抗体-抗原免疫复合物并介导适应性免疫应答。CD16/CD32在B细胞、单核细胞/巨噬细胞、NK细胞、粒细胞、肥大细胞和树突细胞上表达。


检测小鼠样本,可以使用纯的抗小鼠 CD16/32 单克隆抗体作为Fc受体封闭剂。一般来说,100 μL反应体系,10^6细胞,加入0.5-1 μg Purified Anti-Mouse CD16/32 Antibody室温孵育10 min即可有效封闭小鼠Fc受体。如下图所示:

FcR对小鼠腹腔巨噬细胞检测的影响

                                         图2:FcR对小鼠腹腔巨噬细胞检测的影响


CD49b/NK1.1-小鼠NK细胞标志物


CD49bNK1.1是小鼠NK细胞鉴定的两个标志物,实验时,需要根据小鼠品系从中选择一个。例如,BALB/c小鼠用CD49b(DX5),C57BL/6小鼠用NK1.1,分析时圈CD3-CD49b+或者CD3-NK1.1+,C57BL/6小鼠NK细胞检测结果如下图所示:

C57BL/6小鼠NK细胞检测

           图3:C57BL/6小鼠NK细胞检测



Mouse CD90和CD90.1及CD90.2之间的差别


小鼠的CD90蛋白有两个等位基因,Thy1.1(CD90.1)和Thy1.2(CD90.2)。二者主要区别在于第108位的氨基酸的不同。CD90可表达于造血干细胞、神经元、所有胸腺细胞、外周T细胞上。


表达CD90.1的小鼠品系包括AKR、BDP、MA/MyJ等,表达CD90.2的小鼠品系更多,包括BALB/c、CBA/J、C3H/He、C57BL/-、DBA、NZB/-等。实验研究中可采用CD90.1和CD90.2做供受体之间的细胞过继转移,从而研究细胞的增殖分化分布等特征。


Mouse CD45和CD45.1及CD45.2之间的差别


小鼠的CD45蛋白有两个等位基因,CD45.1CD45.2。表达CD45.1的小鼠品系包括FVB、RIII、SJL/J、STS/A、DA等,表达CD45.2的小鼠品系包括AKR、BALB/c、CBA/Ca、CBA/J、C3H/He、C57BL、C57BR、C57L、C58、DBA/1、DBA/2、NZB、SWR、129等。实验研究中可采用CD45.1和CD45.2做供受体之间的细胞过继转移,从而研究细胞的增殖分化分布等特征。


总结

F4/80只表达在小鼠巨噬细胞中,小鼠表面FcR通过Mouse CD16/32纯抗就能有效封闭,不同品种的小鼠,细胞鉴定时可能需要选择不同的指标。



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