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Th1/Th2/Th17和Treg细胞是流式实验中常见的T细胞检测对象，今天来给大家做一个Th1/Th2/Th17细胞的简要介绍，并讲解其检测指标及实例分析。

                                                                                             图1.Th细胞分类示意图

                                                                                         （图片来源于《医学免疫学》）

Th细胞，又称辅助性T细胞(helper T cell)，主要通过不同亚群及相互作用，来活化巨噬细胞和其他免疫细胞以吞噬和清除抗原。Th细胞可以分泌多种细胞因子，参与人体内的各种免疫反应。Th1/Th2/Th17细胞均属于Th细胞，均表达CD4⁺，因此又都被称为CD4⁺T细胞。

Th1/Th2/Th17细胞介绍

Th1细胞

Th1细胞主要分泌Th1型细胞因子如IFN-γ、TNF-α、IL-2，这些细胞因子能促进Th细胞的进一步增殖，进而发生细胞免疫的效应。Th1细胞可通过分泌的细胞因子增强细胞介导的抗感染免疫。

Th2细胞

Th2可分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10及IL-13等细胞因子，这些细胞因子能促进Th2细胞的增殖，进而辅助B细胞活化，从而促进B细胞的增殖、分化和抗体的生成，发挥体液免疫的作用。同时，这些细胞因子可抑制Th1细胞增殖。

                                                图2.Th1/Th2细胞及其分泌的细胞因子

                                                        （图片来源于图虫创意）

Th17细胞

Th17细胞通过分泌IL-17(包括IL-17A到IL-17F)、IL-21、IL-22、IL-26、TNF-α等多种细胞因子参与固有免疫和某些炎症的发生，在免疫病理损伤，特别是自身免疫病的发生和发展中起重要作用。

                            图3.Th17细胞的分化及功能

（图片来源于Wu B , Zhang S , Guo Z , et al. The TGF-beta superfamily cytokine Activin-A is induced during autoimmune neuroinflammation and drives pathogenic Th17 cell differentiation[J]. Immunity, 2021(2):54.）

Th1/Th2/Th17细胞检测指标选择

要检测Th1/Th2/Th17细胞，应当如何选择指标呢？根据过往的实验经验，为大家进行了总结：

表1. Human样本Th1/Th2/Th17细胞检测

表2. Mouse样本Th1/Th2/Th17细胞检测

Th1/Th2/Th17细胞检测，大多数文献显示，科研工作者主要选择其所分泌的细胞因子作为指标，也有部分老师会根据自身实验情况，使用对应细胞亚群的表面标志物或核内标志物进行检测。

另外，需要注意的一点是，选择IFN-γ、IL-4和IL-17A等细胞因子作为检测指标时，需要进行刺激阻断（E-CK-A091）和固定破膜（E-CK-A109），这样才能通过流式细胞仪检测到截留在胞内的细胞因子。

检测实例

下面向大家展示一下实际应用细胞因子进行Th1/Th2/Th17的检测案例，方便大家参考。

人外周血PBMC Th1/Th2（4色）检测

Panel设置：

流式抗体信息：

检测结果：

如上图所示，首先根据FSC/SSC确定PBMC细胞进行圈门，去除粘连体后，利用CD3⁺圈出T淋巴细胞群；再分别根据IFN-γ和CD4⁺圈出Th1细胞群、IL-4和CD4⁺圈出Th2细胞群，即可完成检测。

人外周血PBMC Th17（3色）检测

Panel设置：

流式抗体信息：

检测结果：

如上图所示，根据FSC/SSC圈出PBMC细胞群，在去除粘连体之后，根据CD3⁺圈出T淋巴细胞群，再根据CD4⁺和IL-17A确定Th17细胞群。

注意：

▲PBMC分选后，需要先用细胞因子刺激阻断剂进行刺激阻断培养（本实验用到试剂为：细胞因子激活和蛋白阻断试剂盒（E-CK-A091 ）；

▲PMA刺激会导致人T细胞表面CD4部分内吞，因此我们需要选用对内吞影响小的CD4克隆号抗体SK3；

▲IFN-γ、IL-4、IL-17A需要做同型对照，因为一般情况下细胞因子表达量不高；

▲破膜剂对细胞损伤较大，建议离心后形成的细胞沉淀先弹散成细胞悬液后再加入破膜剂，以减少细胞损伤。