产品常见问题

ELISA FAQs

2020-08-05作者:admin赞:1277

常见客户提问

试剂盒

你们的试剂盒能检测什么物种?

目前我们的试剂盒检测的种属主要为人,小鼠和大鼠,小部分指标涉及猴,兔,猪和鸡等特殊种属。对于那些命名中带有特定物种名称的试剂盒(如人)是专门针对此物种的。如果说明书中没有指明物种,该试剂盒即在常规哺乳动物种属内是通用的。其他特殊种属的检测适用性请联系技术支持确认。

96T试剂盒能检测多少样本?是否需要做复孔?

96T试剂盒,标准品&样本均不做复孔,最多检测88个样本;标准品做复孔,样本做单孔,最多检测80个样本;标准品做单孔,样本做复孔,最多检测44个样本;标准品&样本均做复孔,最多检测40个样本。如果做3复孔,检测的样本数量会相应减少。

为了保证实验结果的准确性,我们建议标准品和样品都做复孔,但是并不是要求ELISA实验一定要做复孔/3复孔,客户可根据自己的需求设定复孔实验。

需检测的样品较多,可否减少标曲的孔数?

为保证结果的准确度,不建议减少标曲的孔数,请至少保证检测 6 个不同的标准品浓度(含空白孔 )。

试剂盒要使用多次,但样本较多,是否可以只做一次标曲?

虽然 ELISA 的操作步骤是相同的,但每次实验的各种影响因数都是有所变化的,所以每次实验时必须重新制作标准曲线,以便得到更准确可靠的检测结果。如果需要做多次实验,溶解后的最高浓度标准品可以分装保存于-20℃,避免反复冻融,半个月内使用有效。

样本

血清血浆样本该选用哪种真空采血管收集?

血清:不含抗凝剂的采血管/含促凝剂采血管。(通常为红色、黄色、橘色管盖的采血管)

血浆:含抗凝剂采血管。(通常为绿色、紫色管盖的采血管 )

样品收集后若在1周内进行检测可保存于2-8℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(3个月内检测),避免反复冻融。在检测前,冷冻过的样本应缓慢地融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物。

采集时如何尽可能避免溶血现象?

溶血可由多种理化因素和毒素引起。在体外,如机械性强力振荡、低温冷冻等均可引起溶血。为避免溶血对检测结果的影响,请:

(1)静脉采血时,回抽压力不宜过大

(2)一次性采血量不宜过少

(3)采集的全血不宜激烈振荡

(4)离心转速不宜过大

(5)收集的全血需尽快处理成血清/血浆,全血不能冻融

(6)若需要麻醉采血,需使用没有溶血作用的麻醉剂

组织/细胞样本收集中提到的“反复冻融”过程该如何操作?

组织样本:组织研磨后,将其-80℃放置1h/液氮放置0.5h,然后置于30℃水浴锅中轻微振荡使其迅速融化,此操作反复1-2次即可。

细胞样本:按上述反复冻融的操作反复2-3次。若为膜蛋白可以适当超声一下,但需要控制好超声的温度、频率。

样本中建议提前加入蛋白酶抑制剂。常规推荐:PMSF。

怎样判断我的样本是否需要稀释或者是否需要其他处理?

试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围,建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度并通过预实验确定样本的实际浓度情况。如果是常规样本类型,可以咨询ELISA技术支持以获取样本的推荐稀释倍数并安排预实验检测。

如果样品中待测物浓度过高或过低,请对样本做适当的稀释或浓缩。如果样本中的分析物浓度远低于试剂盒的最低检测线,建议选择灵敏度更高的试剂盒来检测。

数据分析

分析数据最好的方法是什么?是否可以用excel来绘制标曲?

ELISA 实验中标准品&样品均建议做复孔或三复孔,计算每个浓度标准品的平均 OD 值;

将平均 OD 值减去空白孔的 OD 值(竞争法不需要减空白 OD 值)。

以标准品的浓度为 X 轴,OD 值为 Y 轴,利用作图软件得到合适的拟合曲线并计算样本浓度。

推荐使用 Origin 软件,并通过4-PL(4参数logistic)方法拟合得到标准曲线。Excel拟合方式一般为直线和多项式,不推荐其作为ELISA标曲的拟合方法。

客户可以通过百度下载Origin软件的安装包。

请扫描下方二维码,在“技术资源-ELISA指南版块”,获取关于Origin计算ELISA实验数据详细信息。

自己做的标曲OD值是否需要跟说明书中的基本一致?

说明书上的标曲是指示标曲,主要是用于呈现拟合后标曲的形态以及最高/最低OD值的质控范围。而由于受实验操作、实验环境以及仪器参数设定等因素的影响,客户实际做的标曲OD值可能会跟说明书不一致(整体偏高或偏低),这种情况,建议通过在显色阶段控制前4个蓝色孔有明显颜色梯度以及标曲最大OD值在1.2以上,标曲的相关系数在0.99以上即可作为有效标曲。

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